Er zijn bijna alle bedrijven die debromelaïne enzym poederwordt gemengd met papaïne. Het is moeilijk om de bromelaïne te zuiveren tot 5000GDU/g. maar het is heel gemakkelijk om de papaïne te zuiveren tot 1000.000GDU/g. zelfs tot 2000.000GDU/g. maar de functies van bromelaïne zijn anders dan die van papaïne. de kleur, geur, oplosbaarheid in water en smaak contrasteren met het nepproduct en het echte product. Het verschil is dat het juiste bromelaïne-enzympoeder grijs, geurloos, smaakloos en onoplosbaar in water is.
Maar de valse bromelaïne heeft de volgende kenmerken:
● Het is lichtgeel, aromatisch en lichtzoet en oplosbaar in water. Het is het kenmerk van papaïne.
● Het wordt gebruikt om ontstekingen te verminderen en pijn te verlichten. maar er zijn bijna geen van deze functies in papaïne.
● Het wordt alleen gebruikt als voedingssupplement, niet als voedingsadditief, maar kan inderdaad van farmaceutische kwaliteit zijn. Maar papaïne wordt alleen gebruikt als vleesvermalserpoeder en cosmetica.
We hebben de bromelaïne getest volgens SDS-PAGE-gel en GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL en HPLC-methoden, er zijn minder doelmoleculen in de SDS-PAGE-gelmethode voor nepproducten.
Hieronder volgen de resultaten van de SDS-pagina-elektroforese
De spikkels hierboven laten zien dat alleen het juiste product dezelfde spikkels op de juiste plaats op de foto heeft, maar het nepproduct heeft kleine spikkels, dat betekent dat het molecuulgewicht nauwelijks zichtbaar is.
Het molecuulgewicht van bromelaïne is ongeveer 33.000, maar het molecuulgewicht van papaïne is 21.000. En het HPLC-chromatogram:
U zult zien dat alleen het juiste extract de juiste molecuulgewichten van bromelaïne bevat en detecteerbaar is met HPLC.
Maar als we alleen hebben getest met Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU), zie bijlage II. Zowel het juiste als het valse product hebben dezelfde resultaten als hieronder:
Ananasstengel is erg goedkoop en de snelheid van stengel tot bromelaïne is erg laag, er is enige vervuiling in het productieproces.
Bijna alle bromelaïne-enzympoederfabrieken zijn in de buurt van het veld. Ze gebruiken verse stengel. Het is onmogelijk om de steel over een lange afstand te verzenden. Het ruwe materiaal moet zo snel mogelijk worden gehanteerd wanneer het uit het veld wordt verzameld of het moet worden opgeslagen in een omgeving met lage temperatuur (4-8 graden) om eiwitafbraak te voorkomen. In het echte leven kan de fabrikant aan geen van de twee bovenstaande voorwaarden voldoen vanwege te veel stelen ananas. De redelijke methode is een balans tussen verwerkingstijd en verlies van eiwitactiviteit. Gewoonlijk worden de ruwe grondstoffen geproduceerd in het oogstseizoen van de ananas en worden de ruwe grondstoffen opgeslagen in een omgeving met lage temperaturen (4-8 graden).
We doen een test over de elektroforese van de SDS-pagina. In theorie kunnen we deze verhogen tot 10,000 of 20,000. Maar het zal erg duur zijn. 5000 GDU / g en maak het stabiel, misschien op een malto-ondersteuning / micro-ingekapselde een of zoiets plus biologische extractie / zuivering.
Bijlage I
● Methode 5 SDS-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-PAGE)
SDS-PAGE is een gedenatureerde polyacrylamidegelelektroforesemethode. Het principe van eiwitscheiding bij deze methode is gebaseerd op het feit dat de meeste eiwitten kunnen combineren met de anionische oppervlakteactieve stof natriumdodecylsulfaat (SDS) in een gewichtsverhouding om een complex te vormen
De negatieve lading die door eiwitmoleculen wordt gedragen, is veel groter dan de netto lading van natuurlijke eiwitmoleculen, waardoor het ladingseffect van verschillende eiwitmoleculen wordt geëlimineerd en eiwitten worden gescheiden op basis van hun moleculaire grootte.
Deze methode wordt gebruikt voor kwalitatieve identificatie, controle van zuiverheid en onzuiverheid en kwantitatieve bepaling van eiwitten.
1 instrumentapparaat
Voeding met constante spanning of constante stroom, elektroforesetank met verticale plaat en mal voor het maken van lijm.
2. Reagentia
(1) Water.
(2) Scheidingsgelbuffer (4x, oplossing A) 1,5 mol/L trihydroxymethylaminomethaan zoutzuurbuffer. Weeg 18,15 g trihydroxymethylaminomethaan af en los dit op in een geschikte hoeveelheid water. Breng de pH-waarde met zoutzuur op 88 en verdun met water tot 100 ml.
(3) Weeg 58,0g acrylamide en 20 g N,N'-methyleenbisacrylamide af in 30% acrylamide-oplossing (B-oplossing), los op in warm water en verdun tot 200 ml, filtreer met filtreerpapier (bewaard in donker).
(4) Weeg 10 g natriumdodecylsulfaat af in 10 procent SDS-oplossing (C-oplossing), los op in water en verdun tot 100 ml
(5) Commercialiseringsreagens van tetramethylethyleendiamine-oplossing (TEMED, D-oplossing).
10 procent ammoniumpersulfaatoplossing (E-oplossing) Weeg 10 g ammoniumpersulfaat af, los op in water en verdun tot 100 ml. Het wordt aanbevolen om het voor gebruik klaar te maken of apart te bewaren bij -20 graden gedurende 2 weken.
(7) Geconcentreerde rubberbuffer (4 ×, F-oplossing) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethaan Zoutzuurbuffer, weeg 6,05 g Trihydroxymethylaminomethaan af, voeg een geschikte hoeveelheid water toe om op te lossen, stel de pH-waarde in op 6,8 met zoutzuur zuur en verdun met water tot 100 ml.
(8) Elektrodebuffer (10 x) Weeg 30 g trimethylaminomethaan, 144 g glycine en 10 g natriumdodecylsulfaat af, los ze op in water en verdun tot ongeveer 800 ml. Stel de pH-waarde in op 8.1-8.8 met zoutzuur en verdun tot 1000 ml met water.
(9) Niet-gereduceerde monsterbuffer (4 ×) Weeg 303 g trimethylaminomethaan, 20 mg broomfenolblauw en 8,0 g natriumdodecylsulfaat af, meet 40 ml glycerol af, los op in water en verdun tot ongeveer 80 ml. Stel de pH in op 68 met zoutzuur en verdun met water tot 100 ml.
(8) Elektrodebuffer (10 x) Weeg 30 g trimethylaminomethaan, 144 g glycine en 10 g natriumdodecylsulfaat af, los op in water en verdun tot ongeveer 800 ml. Pas de DH-waarde aan naar 81-88 met zoutzuur en verdun tot 1000 ml met water
(9) Niet-gereduceerde monsterbuffer (4 ×) Weeg 3,03 g trimethylaminomethaan, 20 mg broomfenolblauw en 80 g natriumdodecylsulfaat af, meet 40 ml glycerol af, los op in water en verdun tot ongeveer 80 ml. Stel de pH in op 6,8 met zoutzuur en verdun met water tot 100 ml.
(10) Gereduceerde teststofbuffer (4 ×) Weeg 3,03 g trimethylaminomethaan, 20 mg broomfenolblauw en 80 g natriumdodecylsulfaat af, meet 40 ml glycerol af, los op en verdun met water tot ongeveer 80 ml en voeg toe - 20ml mercapto-ethanol, stel de pH in op 6,8 met zoutzuur, verdun met water tot 100 ml (of 3,03 g trimethylaminomethaan, 20 mg broomfenolblauw, 8,0 g natriumdodecylsulfaat, meet 40 ml glycerol af, los op in water en verdun tot 80 ml, pas de pH aan tot 6,8 met zoutzuur, verdun met water tot 100 ml en voeg voor gebruik dithiothreitol toe tot 100 mmol/L).
● Bijlage II
Gelatine-digestie-eenheid Analytische methode (GDU)
A. Doel: Deze procedure wordt gebruikt om de proteolytische activiteit van bromelaïne-enzympoeder te bepalen.
B. Uitrusting:
1. pH-meter
2. Waterbad met constante temperatuur op 45,0 graden ± 0,1 graden
3. Analytisch evenwicht
4. Maatkolven
5. Volumetrische pipetten
6. Timer
7. Digitale buret (nauwkeurigheid van 0,1 ml)
8. Zuurkast
9. Automatische pipetters
C. Veiligheidsmaatregelen:
Deze test moet in de zuurkast worden uitgevoerd.
1. Gebruik standaard laboratoriumveiligheidspraktijken.
2. Formaldehyde: Bereid en bewaar te allen tijde in een zuurkast. Bekend carcinogeen en teratogeen.
3. Peroxide: sterke oxidator
D. Reagentia en reagenspreparaten:
1. Gedistilleerd water: ongeveer 500 ml: stel de pH in op 4,5 met 0,1 N HCI.
2. Gelatinesubstraat:
A. Los 25 gram gelatine (Mikrobiologie. 1.04070) op in 375 ml heet water, breng aan de kook. Koel tot 45 graden.
B. Stel de pH in op 4,5 met 0.1 N HCI en verdun tot 500 ml pH 4,5 gedestilleerd water.
C. Houd het gelatinesubstraat op 45 graden.
3. Bufferoplossing:
A. Voeg langzaam 15 g NaCl toe aan 40-50 ml water in een bekerglas van 150 ml en roer om op te lossen.
B. Voeg 0.570 ml azijnzuur toe.
C. Stel de pH in op 4,5 met 0.2N HCL (het volume zal groter zijn dan 100 ml.)
4. 3 procent waterstofperoxide:
A. Pipetteer 2,5 ml 30 procent waterstofperoxide (voorraadoplossing) in een maatkolf van 25 ml en vul aan tot de maatstreep met gedestilleerd water pH 4,5
5. 37 procent formaldehyde pH 9.0: a. Pas een voldoende volume (100 ml) formaldehyde aan op pH 9,0 met 0,1 N NaOH (ongeveer 20 ml formaldehyde per monster voorafgaand aan pH-aanpassing.)
Gelatine Digestion Unit Analytical Method (GDU) - vervolg
6. 0.100 N NaOH: (gestandaardiseerd gekocht) Stamoplossing: gestandaardiseerd op 0,100 N
E. Werkwijze:
1. Enzymbereiding:
A. Enzymbereiding berekenen
Gewicht {{0}}/doelactiviteit (ongeveer 0,05 g of 50 mg)
A. Weeg het enzym nauwkeurig af in een maatkolf van 50 ml
B. Voeg 8,3 ml bufferoplossing toe.
B. Laat 30 minuten staan op kamertemperatuur.
C. Verdun tot 50 ml met gedestilleerd water pH 4,5, voeg een klein roerstaafje toe en roer nog eens 10 tot 15 minuten
2. Enzymprocedure:
A. Pipetteer 25 ml gelatinesubstraat in elk van de twee bekerglazen van 100 ml met roerstaven en plaats ze gedurende 5 minuten in een waterbad van 45 graden, één voor de testoplossing en de andere voor de blanco oplossing.
B. Testoplossing:
1) Voeg 1,0 ml bromelaïne-enzympoederoplossing toe aan het bekerglas dat bestemd is voor de testoplossing, begin met timen en ronddraaien.
2) Voeg na precies 20 minuten incubatie bij 45 graden 0,1 ml 3 procent waterstofperoxide toe en roer.
3) Incubeer nog eens 5 minuten.
4) Haal de beker uit het waterbad en plaats onder constant roeren de pH-sonde.
5) Noteer de pH na 10 seconden (initiële pH)
6) Stel in op pH 6.0 met 0.1 N NaOH. (Ongeveer 2-4 ml)
*Opmerking: bij het aanpassen van de pH naar 6.0 wees voorzichtig bij pH 5,8; de pH stijgt langzaam en minieme toevoegingen van NaOH op dit punt zullen de pH aanzienlijk verhogen.
7) Voeg onder constant roeren 10 ml 37 procent formaldehyde pH 9,0 toe.
8) Noteer de pH na 10 seconden en 1 minuut.
9) Titreer tot pH 9.0 met 0.1 N NaOH.
10) Noteer het titratievolume.
Dit is de testtiter, T. c.
Blanco oplossing: De blanco oplossing moet gelijktijdig met de testoplossing worden uitgevoerd. Dit wordt bereikt door de bepaling van de blanco oplossing te starten 12 minuten nadat de testoplossing is gestart. Dat geeft u de tijd om de test op de testoplossing te voltooien voordat u verder moet gaan met de blanco oplossing. 1) Voeg 0.1 ml 3 procent waterstofperoxide toe aan het bekerglas dat bestemd is voor de blanco-oplossing en zwenk.
2) Voeg na precies 20 minuten incubatie bij 45 graden 1,0 ml bromelaïne-oplossing toe en roer.
3) Incubeer nog eens 5 minuten.
GELATINE SPIJSVERTERINGSEENHEID ANALYTISCHE METHODE (GDU) - vervolg.
4) Haal de beker uit het waterbad en plaats onder constant roeren de pH-sonde.
5) Noteer de pH na 10 seconden (initiële pH)
6) Stel in op pH 6.0 met 0.1 N NaOH. (Ongeveer 2-4 ml)*Zie opmerking hierboven.
7) Voeg onder constant roeren 10 ml 37 procent formaldehyde pH 9,0 toe.
8) Noteer de pH na 10 seconden en 1 minuut.
9) Titreer tot pH 9.0 met 0.1 N NaOH.
10) Noteer het titratievolume. Dit is de blanco titer, B.
F. Berekening:
1. Definitie: Eén gelatine-digestie-eenheid is die hoeveelheid enzym die na 20 minuten digestie bij 45 graden 1 mg aminostikstof zal vrijmaken uit een standaard gelatine-oplossing bij pH 4,5 of pH 5,5 (GDU pH 4,5 of pH 5,5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Waarbij: T=Testtiter (ml 0.1 N NaOH) B=Blanco titer (ml 0,1 N NaOH) N=Normaliteit van gestandaardiseerd NaOH (dwz 0,100) Wt (g)=Begingewicht van enzym
G. Testparameters:
1. Enzympreparaten worden verdund tot een concentratie van ongeveer 0.001 g/ml (1 mg/ml) of voor bromelaïne-enzympoederconcentraat ongeveer 1-2 GDU/ml. Bij elke run wordt een referentiemateriaal getest om de nauwkeurigheid van de methode te garanderen.
Guanjie levert bromelaïnepoeder in bulk, met behulp van de GDU-testmethode. Ons productieproces werkt volgens CGMP-standaardworkshops, waarbij gebruik wordt gemaakt van drie productielijnen in twee fabrieken en twee onafhankelijke laboratoria. Voor vragen over onze producten kunt u contact met ons opnemen viainfo@gybiotech.com.
